研究助成
2021年度 ライフサイエンス研究助成
脂質結合タンパク質に着目した上皮間葉移行の新規分子機構の解明
| 研究題目 | 脂質結合タンパク質に着目した上皮間葉移行の新規分子機構の解明 |
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| 年度/助成プログラム | 2021年度 ライフサイエンス研究助成 |
| 所属 | 岡山大学 異分野基礎科学研究所 |
| 氏名 | 千住 洋介 |
| キーワード | 生体膜 / 脂質結合タンパク質 / 細胞骨格・運動 / 上皮間葉転換 (EMT) / がん |
| 研究結果概要 | 1. 細胞間接着において、脂質結合タンパク質MIMがどのようにして細胞膜とアクチン細胞骨格を架橋するかを調べるためには、アクチン結合タンパク質のような相互作用分子の同定は必須である。そこで、タンパク質複合体の解析はBioID を用いた。 得られた相互作用分子の候補は、細胞間接着で MIMとの共局在を確認した。 2. MDCK (イヌ腎臓尿細管上皮細胞) に蛍光タンパク質EGFP/mCherryを融合したMIMとその相互作用分子を過剰発現、またはCRISPR/Cas9システムによってノックアウトした。そして、共焦点顕微鏡によるライブイメージングによって、分子の局在、細胞間接着の形成、形態の表現型を調べ、MIMとその相互作用分子の機能を明らかにした。さらに、3D-SIMなどの超解像顕微鏡を用いて、局在の高分解能蛍光画像をナノスケールの高精度で取得した。 3. 透過型電子顕微鏡 (TEM) を用いて、細胞間接着の超微細形態、特に細胞膜の曲率の変化を観察した。さらに、電子線トモグラフィーによって、細胞間接着の三次元構造を再構成することで、断層面や内部の三次元構造を明らかにした。 |
| 公表論文 | 1: Senju Y, Mushtaq T, Vihinen H, Manninen A, Saarikangas J, Ven K, Engel U, Varjosalo M, Jokitalo E, Lappalainen P. Actin-rich lamellipodia-like protrusions contribute to the integrity of epithelial cell-cell junctions. J Biol Chem. 2023 May;299(5):104571. 2: Senju Y, Hibino E. Moesin-ezrin-radixin-like protein merlin: Its conserved and distinct functions from those of ERM proteins. Biochim Biophys Acta Biomembr. 2023 Feb;1865(2):184076. 3: Senju Y, Tsai FC. A biophysical perspective of the regulatory mechanisms of ezrin/radixin/moesin proteins. Biophys Rev. 2022 Jan 28;14(1):199-208. 4: Tsai FC, Henderson JM, Jarin Z, Kremneva E, Senju Y, Pernier J, Mikhajlov O, Manzi J, Kogan K, Le Clainche C, Voth GA, Lappalainen P, Bassereau P. Activated I-BAR IRSp53 clustering controls the formation of VASP-actin-based membrane protrusions. Sci Adv. 2022 Oct 14;8(41):eabp8677. |